Criblage des conditions de cristallisation
Le criblage initial des conditions de cristallisation sera réalisé sur les deux robots de pipetage disponibles sur la plate-forme.
Le Tecan Genesis est utilisé pour pipeter les solutions mères dans les réservoirs des puits (100-150µl) et effectuer des essais de cristallisation dans de grands volumes (0.5µl à 2µl). Si vous désirez utiliser ce robot, il vous faut 80µl de solution de protéine pour une boite 96 puits à une seule concentration de protéine.
Le Cartesian Microsys est utilisé pour réaliser des gouttes de faible volume dans des plaques dont les réservoirs sont préalablement remplis avec le robot Tecan. En routine, des volumes de 100nl de solution de protéine et 100nl de précipitant sont utilisés. Cette option nécessite seulement 30µl de solution de protéine pour une boite 96 puits à une seule concentration de protéine.
Tous les criblages seront effectués dans des plaques 96 puits (gouttes assises) et trois conditions différentes peuvent être testées dans chaque puits (différentes concentrations de protéine ou différents ligands). Nous utilisons actuellement les kits de cristallisation de Nextal® (cliquez sur le nom du kit pour avoir la composition détaillée) :
La cristallisation sera suivie en utilisant le robot de stockage et de visualisation BIOSTORE (Biotom).
Livraison : le même jour si l’expérience est planifiée 10 jours à l’avance.
Prix : 90 € par boite, indépendemment du nombre de gouttes et du nombre de puits utilisés.
Contact : Marc.Graille@ibbmc.u-psud.fr
Optimisation
L’optimisation des cristaux de protéine est un processus long et difficile. De nombreuses étapes peuvent être automatisées en utilisant les stratégies développées par le groupe. Les analyses bioinformatiques et biochimiques peuvent également permettre de redéfinir un domaine protéique se prêtant mieux à la cristallisation.
Les expériences doivent être définies et planifiées différemment pour chaque protéine, et demandent une part importante d’intervention humaine et de fouille de données. L’optimisation des cristaux ne sera envisagée qu’après l’analyse de chacune des protéines.
Prix : Analyse préliminaire d’un projet d’optimisation de cristaux : 100-600 €
Contact : Marc.Graille@ibbmc.u-psud.fr